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犬惡絲蟲PCR檢測試劑盒說明書

產品簡介

犬惡絲蟲PCR檢測試劑盒說明書
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IPO38檢測試劑盒
NAP1 (nucleosome assembly protein 1) 核小體組裝蛋白1(多肽)
N-cadherin N-鈣粘附分子抗原

更新時間:2021-03-14
訪問次數:737
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

 產品名稱

 犬惡絲蟲PCR檢測試劑盒說明書

 英文名稱

 Dirofilaria immitisPCR

 貨號

 LZP6655

組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
人高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)elisa試劑盒Anti-B4GALT1 Antibody研究領域  染色質和核信號 細胞周期蛋白

人干擾素調節因子8(IRF8)elisa試劑盒Anti-B4GALT3 Antibody研究領域  細胞生物 免疫學 信號轉導 激酶和磷酸酶

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DNA損傷誘導轉錄因子4樣蛋白(DDIT4/RTP801)elisa試劑盒Anti-BAGE2 Antibody研究領域  腫瘤 細胞生物 信號轉導 細胞凋亡 轉錄調節因子 表觀遺傳學

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HSP60抗體(IgG)elisa試劑盒Anti-BAIAP2L1 Antibody研究領域  細胞生物 染色質和核信號 信號轉導 細胞凋亡 激酶和磷酸酶

大鼠肺炎病毒抗體(PV-Ab)elisa試劑盒Anti-BAIAP2L2 Antibody研究領域  腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉導 細胞凋亡

大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)elisa試劑盒Anti-BAIAP2L2 Antibody研究領域  細胞生物 免疫學 染色質和核信號 信號轉導 激酶和磷酸酶

大鼠Ras相關C3肉毒素底物1(RAC1)elisa試劑盒Anti-BAK1 Antibody研究領域  細胞生物 細胞凋亡

3-甲氧基-4-硝基苯酚  二苯基乙氧基膦  (五苯基)二苯基磷

鹽酸莫西沙星  (五苯基)二苯基磷  紅熒烯

N,O-1,3-二乙酰基吲哚  紅熒烯  4,4-雙(5-甲基-2-苯并唑基)二苯

3-溴苯  4,4-雙(5-甲基-2-苯并唑基)二苯  四溴對烯

3-Mercapto-1-hexal  3-巰基-1-己醇  51755-83-0

NICKEL(II) TE BASIC HYDRATE  堿式碳酸鎳  12607-70-4

Nickel(II) nitrate hexahydrate  鎳  13478-00-7

Nickel(II) acetate tetrahydrate  乙酸鎳  6018-89-9

大鼠載脂蛋白C1(APOC1)ELISA試劑盒 ,英文名: APOC1 ELISA Kit

Mouse phosphotylisital 3 kinase (PI3K) ELISA Kit 小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA試劑盒

MouseLeptin,LEPELISAkit 小鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanfibromodulin,FMODELISAKit人纖調蛋白規格:48T/96T

細胞/組織高質純化高爾基體分離試劑盒10次

ELISAKitMMP-5大鼠基質金屬蛋白酶5規格:48T/96T
犬惡絲蟲PCR檢測試劑盒說明書3-Bromo-4-hydroxy,97%通用試劑 5G

2-Methoxycinnamaldehyde, predominantly...通用試劑 50G

α-Bromocinnamaldehyde,98%通用試劑 25G

trans-4-Nitrocinnamaldehyde,≥97.0%通用試劑 1G

5-Bromo-2-thiophenecarboxaldehyde,95%通用試劑 5G

2,4-Dimethyl,≥90%通用試劑 25G

4-(Diethylami)salicylaldehyde,98%通用試劑 5G

4-Formyl,95%通用試劑 5G

3-Formyl,98%通用試劑 1G

Ferrocenecarboxaldehyde,98%通用試劑 1G

Bicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2-carboxaldeh...通用試劑 5G

Pyridoxal 5′-phosphate hydrate,≥98%通用試劑 1G

3,5-Dibenzyloxy,98%通用試劑 1G

3-Bromo,97%通用試劑 25G

4-Benzyloxy,97%通用試劑 25G
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

 

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