產(chǎn)品名稱：胚腎細(xì)胞
英文簡稱：AAV-293細(xì)胞

貨號：LZ-X969428
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
開菲爾乳桿菌異鼠李素;Isorhamnetin尿素瓊脂斜面pH7.2抗Ⅲ型膠原抗體

大腸埃希氏菌(大腸桿菌)羽扇豆;Lupeol賴氨酸脫羧酶試驗抗IV型膠原抗體

渾濁紅球菌異去甲蟛蜞菊內(nèi)酯;Demethylwed氨基酸脫羧酶試驗對照抗Ⅵ型膠原抗體

香茅假單胞菌23-乙酰澤瀉B;AlisolB2無菌液體石蠟抗I型膠原抗體

解肝磷脂土地桿菌鹽酸小檗堿;BerberinehydONPG培養(yǎng)基抗Ⅴ型膠原抗體

紅平紅球菌異補(bǔ)骨脂素;Isopsoralen緩沖葡萄糖蛋白胨水抗Ⅹ型膠原抗體

土生拉烏爾菌（土生克雷伯菌）原花青素;ProcyanidinV-P試劑前列腺素氧化環(huán)化酶1抗體

解藻弧菌（溶藻弧菌）原兒茶;Protocatechuald蛋白胨水前列腺素氧化環(huán)化酶2抗體

洋蔥伯克霍爾德氏菌原兒茶酸;3,4-DihydroxybeKovacs氏靛基質(zhì)試劑C-藻藍(lán)素/藻藍(lán)蛋白抗體

霍亂弧菌柚皮素;Naringenin磷酸鹽緩沖液pH7.2C-肽

肺炎克雷伯氏菌肺炎亞種楊梅素;Myricetin無菌磷酸鹽緩沖液pH7.2鈣結(jié)合蛋白抗體

日勾維腸桿菌異皮啶;Isofraxidin無菌磷酸鹽緩沖液pH7.2C-反應(yīng)蛋白抗體

施氏假單胞菌亞麻酸乙酯;Linolenicacid高鹽察氏培養(yǎng)基鼠抗人C-反應(yīng)蛋白單克隆抗體

惡臭假單胞菌乙酰;Acetylaconitin磷酸鹽緩沖液pH7.2環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白抗體

表皮葡萄球菌鹽酸黃連堿;Coptisinechlo無菌磷酸鹽緩沖液pH7.2磷酸化環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白抗體
AAV-293細(xì)胞兔抗人Kappa鏈抗血清（k-鏈抗血清）斷血流皂苷A（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

兔抗人IgG（γ-鏈）恒定區(qū)抗血清對氧苯Human, Mouse

牛血清白蛋白抗血清對羥苯(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

熒光素Cy7標(biāo)記兔IgG(流式同型對照)對香豆;對羥肉桂(標(biāo)準(zhǔn)品)Human

熒光素Cy7標(biāo)記小鼠IgG(流式同型對照)對葉百部（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse

熒光素Cy7標(biāo)記羊IgG(流式同型對照)對葉百部三鹽Human, Mouse, Rat

熒光素Cy7標(biāo)記大鼠IgG(流式同型對照)盾葉薯蕷（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse

Alexa Fluor 555標(biāo)記兔IgG(流式同型對照)盾葉新苷Human, Mouse, Rat

熒光素PE標(biāo)記兔抗FITC多被銀蓮花皂苷R8（標(biāo)準(zhǔn)品）Escherichia coli