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產(chǎn)品名稱：肺巨細胞癌細胞(高轉移)
英文簡稱：95D細胞

貨號：LZ-X969484
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

天藍色鏈霉菌黃芩苷;BaicalinDubos肉湯基礎DubosBrothBase肝再生增強因子抗體

燼灰鏈霉菌黃藤素;PalmatinechloriDubos肉湯基礎添加劑抗堿性磷酸酶抗體

產(chǎn)色鏈霉菌灰氈毛忍冬皂苷乙;MacranthoidDubos油酸瓊脂基礎DubosOleicAgarBaseα－甲基酰基輔酶A消旋酶抗體

雙重輪絲鏈霉菌黃芪甲苷;AstragalosideIDubos油酸瓊脂基礎添加劑神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體

金霉素鏈霉菌虎杖苷;Polydatin小川氏培養(yǎng)基基礎β淀粉樣肽1-42(C端抗體)

白色鏈霉菌槲皮苷;Quercitrin培養(yǎng)基β淀粉樣肽（1-16）抗體

白黃鏈霉菌蒿甲;ArtemetherMiddleBrook7H10瓊脂基礎MiddleBrook7H10寒天基礎MiddleBrook7H10AgarBaseβ淀粉樣肽β-Amyloid1-40/Aβ1-40C端抗體

紫色小單孢菌(絳紅小單孢菌)槲皮素;QuercetinMiddleBrook7H11瓊脂基礎MiddleBrook7H11寒天基礎MiddleBrook7H11AgarBase血管生成素-1抗體

嗜熱乳酸鏈球菌胡黃連苷Ⅱ;PicrosideⅡMiddlebrook7H9肉湯基礎Middlebrook7H9BrothBase血管生成素-2抗體

孢小單孢菌絳紅變種胡黃連苷Ⅰ;PicrosideⅠMiddlebrookADC增菌液MiddlebrookADCEnrichment錨定蛋白G抗體

紫色小單孢菌(絳紅小單孢菌)黃杞苷;EmgelitinMiddlebrookOADC增菌液MiddlebrookOADCEnrichment心鈉肽（心鈉素）抗體

運動發(fā)酵單孢菌和厚樸酚;HonokiolLowenstein-Jensen培養(yǎng)基基礎Lowenstein-Jensen培地基礎Lowenstein-JensenMediumBase血管緊張素Ⅱ-2型受體抗體

尿素八疊球菌厚樸酚;Magnolol酸性L-J培養(yǎng)基基礎酸性L-J培地基礎AcidL-JMediumBase膜粘連蛋白A1抗體

亞黃八疊球菌胡蘿卜苷;EleutherosideA堿性L-J培養(yǎng)基基礎アルカリ性L-J培地基礎AlkalineL-JMediumBase膜粘連蛋白I抗體

藤黃八疊球菌β-胡蘿卜素;β-Carotene雙抗巧克力瓊脂基礎BC寒天基礎Bi-AntiChocolateAgarBase膜粘連蛋白Ⅱ抗體
95D細胞纖維母生長因子5抗原維生素B12(標準品)Human, Mouse

衰老關鍵蛋白抗原維生素B3(標準品)Human, Mouse

FosB抗原維生素B6（標準品）Human

FOS樣抗原2維生素C(標準品)Human, Mouse, Rat

叉頭蛋白F1抗原維生素C鈉（標準品）Human

插頭蛋白J1抗原維生素K3,萘醌(標準品)Human

FoxP1（T轉錄因子）抗原萎銹靈(標準品)Human

插頭蛋白M1抗原肟菌酯(標準品)Human, Mouse, Rat

麻疹病抗原（麻疹病融合蛋白）烏拉地爾(標準品)Human, Rat
注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞，并且通過調整相關設置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。